777娱乐下载

10x Gennomics 单细胞免疫组库测序

又称10x单细胞V(D)J测序,指通过特异性提取富集T/B细胞TCR/BCR区域RNA,通过比对、拼接、筛选、注释等构建免疫组库,分析得到TCR/BCR多样性序列,从而获得机体的免疫特征。

利用微流控芯片制备单细胞体系;选择5'端接头的通用引物和免疫分子恒定区的巢式引物进行V(D)J富集;实现成对的重链和轻链(B 细胞)或 α 和 β 链(T 细胞)的V(D)J全长测序。

应用领域
免疫生物学;
肿瘤免疫治疗;
辅助抗体/疫苗研究;
免疫系统疾病研究;
移植和免疫重建

技术路线

分析内容
标准信息分析
(需提供参考基因序列、参考基因组序列及基因注释结果)
1.测序数据统计与评估
2.比对与注释:样本基本信息结果统计、样本contig注释信息结果统计、样本consensus注释信息结果统计
3.Clonotype分型
4.特征分析、CDR3特征分析、V/J基因特征分析、V-J paired特征分析
5.多样本分析:样本间Clonotypes比较、Overlapping Clonotype聚类分析、Overlapping Clonotype差异分析

定制化信息分析
和10x Genomics 5’转录组关联分析

样品要求
样品类型:新鲜人或小鼠细胞悬液、血液(全血、PBMC等)、冻存细胞悬液。
细胞来源:血液提取、磁珠富集、流式分选、组织解离、冷冻保存;
细胞大小:小于40μm;
样品总量:细胞悬浮液,一个样本细胞起始量约1x105个;
样品浓度:最低浓度不低于1x103 cells/µL;
质量要求:细胞活性大于90%,理想浓度1000个/μL(500~2000个/μl);
细胞培养基及缓冲液不能含有Ca2+和Mg2+等影响酶活性的物质。

项目周期
标准流程完成时间为50个工作日。

参考文献
Azizi E, Carr A J, Plitas G, et al. Single-cell map of diverse immune phenotypes in the breast tumor microenvironment[J]. Cell, 2018, 174(5): 1293-1308. e36.
Guo X, Zhang Y, Zheng L, et al. Global characterization of T cells in non-small-cell lung cancer by single-cell sequencing[J]. Nature Medicine, 2018, 24(7): 978.
Zemmour D, Zilionis R, Kiner E, et al. Single-cell gene expression reveals a landscape of regulatory T cell phenotypes shaped by the TCR[J]. Nature immunology, 2018, 19(3): 291.
777娱乐下载 Paulson K G, Voillet V, McAfee M S, et al. Acquired cancer resistance to combination immunotherapy from transcriptional loss of class I HLA[J]. Nature communications, 2018, 9(1): 3868.

至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome! 至尊大满贯 - Welecome!